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波尔山羊人工授精技术及效果分析

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发表于 2017-5-12 01:04:01 | 显示全部楼层 |阅读模式
羊人工授精技术是用假阴道采集种公羊的精液,对精液品质进行检查和稀释后,再用输精器将一定量的精液输入到发情母羊生殖道内,用以代替公母羊自然交配而繁殖后代的一种技术。人工授精技术可以提高种公羊的配种效能,扩大配种母羊的头数,不仅可以有效地改变羊的交配过程,还能够提高优秀种公羊的配种率,这在养羊生产中具有重要意义。
波尔山羊的人工授精与绵羊相似,但通过子宫颈管实施子宫内输精比绵羊容易。其次,有公山羊存在时母羊的发情鉴定( 即使在同情发情后) 更为有效,即使没有公羊也可进行母山羊的发情鉴定。因此,在生产实践中,波尔山羊的人工授精更容易推广。例如在法国,20 世纪80 年代采用人工授精的山羊数量增加了4 倍。由于精清与富含牛奶/卵黄的稀释液之间的相互作用会对精子产生毒害作用,所以山羊精液的冷藏和冷冻保存都存在一定困难。

1 采精和精液保存
波尔山羊通常用假阴道采精,也可通过电刺激采精,但波尔山羊对电刺激的耐受性不如绵羊,电刺激后精清组分改变,可降低精子耐受冷冻保存的能力。公山羊是季节性繁殖的动物,春夏两季精子质量和数量有所降低。

1. 1 精清对精液保存的影响
波尔山羊精液保存的主要问题是,在含有牛奶和卵黄的稀释液中,精清的组分可能产生损伤精子活力的物质。精清中与卵黄作用后产生有毒物质的成分主要是由尿道球腺分泌的卵黄凝固酶( EYCE) ,这种酶可以凝结卵黄,并将卵黄磷脂水解为脂肪酸及具有杀精子作用的溶血卵磷脂。EYCE 主要通过磷脂酶A 发挥作用,但其也含有脂肪酶。尿道球腺的分泌物也可与牛奶产生毒性作用。分子量( 55 ~ 60) × 103 的糖蛋白脂肪酶,现命名为BUSgp60,其结构与胰腺的脂肪酶PLRP2 相似,能使牛奶中甘油三酯产生油酸。因此在稀释液中可使用脱脂奶,其效果取决于奶中残余的脂肪量。有研究表明,EYCE 和BUSgp60 是同种蛋白质,这一结果还有待证实。总之,波尔山羊精液的稀释液要么使用脱脂
奶,以保证精子充分存活; 要么在加入卵黄稀释液前除去精清。除去精清的办法是将精液用Kerbs -Ringer 磷酸缓冲液稀释后离心。

1. 2 液态精液
波尔山羊人工授精中可以采用两种策略使用液态精液。
简单稀释液冷藏精液: 用简单稀释液洗涤除去精清,用卵黄- 柠檬酸稀释液或卵黄- Tris - 果糖稀释液稀释精液,于5℃保存备用。除去精清耗时而且导致大量精子损失,因此可使用脱脂奶稀释液稀释后在5℃保存。精子在脱脂奶稀释液中的有效寿命相对较短( 大约12 h) ,但脱脂奶稀释液的使用仍很广泛。低浓度的卵黄含量( 约2. 5%) 毒性作用相对较小,所以葡萄糖- 柠檬酸或Tris - 果糖稀释液中加入低浓度卵黄也可有效用于精液的稀释保存。
室温稀释保存: 若精子温度未降到15℃以下,则不需要加入卵黄防止冷休克。脱脂奶和以黄豆脂为基础的稀释液能在15 ~ 22℃下使精子活力维持24 h 左右。

1. 3 冷冻保存
冷冻保存波尔山羊精液时,卵黄稀释液比脱脂奶稀释液使用更为广泛。最广泛使用的稀释液是脱脂奶粉- 果糖和Tris - 果糖- 柠檬酸- 卵黄稀释液。卵黄在稀释液中含量低于2% 时,可采用卵黄稀释液而无需去除精清。甘油是最有效的冷冻保护剂,而且可以分一次或两次添加。研究认为,对已清洗过的精子,最初用不含甘油的卵黄- 柠檬酸稀释液稀释,精液温度降到4℃时,再加入含有14%甘油的稀释液。如果精子未经洗涤,甘油应在30℃时一次加入。采用子宫颈管内输精时,同样存在与绵羊相似的精子数量和输精体积之间的比例问题。建议: 子宫颈管内输精时先将高浓度的稀释液进行稀释( 卵黄的最终浓度不低于2%) 以增加稀释液的体积,采用一步法稀释,稀释比例为1∶ 1 ~ 1∶ 4。精液可以在干冰表面冻为颗粒,或用液氮熏蒸法和程控冷冻仪中冷冻制备细管冻精。颗粒冻精解冻后精子的复苏率较高,解冻方法改进后,细管冻精也可以得到满意的复苏率,而且细管的使用比颗粒方便,已逐渐成为精液冷冻保存的首选方法。尽管波尔公羊个体间差异较大,但冷冻解冻后输入子宫的活精子数达到5 × 106 时受胎率与自然配种时相当。精子数量和繁殖效率之间的关系尚不清楚,大规模的研究结果很少。但专家建议,每次输精使用( 1 ~ 1. 25) × 108 精子,但也有学者建议,由于波尔山羊输精精子数与绵羊相当,解冻方法也与绵羊冻精一致。

2 输精
鲜精直接输精时可采用阴道内输精,但稀释精液或冷冻精液阴道内输精效果很不理想,因此主要采用子宫颈管内输精或腹腔镜子宫内输精。子宫颈管内输精是最常用的方法,尤其是在规模化养殖的羊群。因为波尔山羊子宫颈管比绵羊更易穿过,所以大量的精子可以穿过子宫颈管进入子宫内。虽然可以使输精导管穿过子宫颈管而直接将精液输入子宫内,但许多技术人员更愿意在子宫颈管里存留一些精液,以免子宫内输精精液仅进入一侧子宫角内。然而,有学者认为,子宫颈管内输精失败率高,一是因为输精导管插入子宫颈管的深度不易掌握,二是输精过程中可能损伤子宫颈管或子宫。输精深度与受胎率有密切关系,子宫内输精受胎率最高,输精位置越靠近子宫颈管后部,受胎的机会越少。熟练的操作是提高受胎率的关键因素。腹腔镜子宫内输精的程序与在绵羊一样。与子宫颈管内输精相比,这一方法需要的精子浓度较低( 约2 ×107 ) ,而且可获得较高的受胎率,但对技术要求高。
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